算法經(jīng)過優(yōu)化后猫态，iSTORM超高圖像可以實現(xiàn)實時重構(gòu)治拿，立等可得。
使用物理鎖定的方式，實時追蹤樣品上的一個基準(zhǔn)點的位置婉固，并根據(jù)此移動樣品位置吠童，補償樣品漂移。因為基準(zhǔn)點可以在樣品制備之前加入稼乃，并且在成像過程中亮度保持穩(wěn)定输奢，所以不會增加樣品制備的復(fù)雜性，可以在整個成像過程中保持樣品位置穩(wěn)定在1nm左右之仍。
根據(jù)樣品及結(jié)構(gòu)的不同，成像時間也不同。結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的固定細(xì)胞可能要幾分鐘到十幾分鐘谆藐，活細(xì)胞成像最快可以幾秒鐘完成圣界。
使用配置中的緩沖液和染料及照明光配合监灌，可以使樣品上標(biāo)記的熒光染料“閃爍”贷币，使得原始圖像上可以獲得單分子的熒光染料圖像，之后通過單分子定位原理亏狰，對每個亮點進(jìn)行位置擬合役纹，并記錄在超高成像結(jié)果中。單個熒光點的定位精度與拍攝中獲得的熒光點光子數(shù)目有關(guān)系暇唾，一般情況下可以將分辨率提升10倍促脉。
可以先用寬場成像策州，對樣品整體進(jìn)行快速掃描瘸味，找到目標(biāo)細(xì)胞后進(jìn)行超高成像。
針對固定的細(xì)胞我們有專用的雙通道和三通道成像緩沖液試劑盒硫戈，進(jìn)行單獨售賣。
正常情況下，以雙通道為例汁胆，曝光時間30ms, 一邊拍以便進(jìn)行實時重構(gòu)梭姓，拍攝10000幀需要8--10min左右。如果先拍照后分析撰类，曝光時間10ms為例驱请，拍攝10000幀需要1min40s左右。
樣品最好是染色完成后,及時進(jìn)行拍照墓永，樣本來不及拍照可以避光保存在4℃，保存時間不超過3天辜尝。
由于力顯智能科技的iSTORM產(chǎn)品所具備的20nm超高分辨率、2-3通道同時成像敌痘、界面友好咨锐、簡單易用、系統(tǒng)穩(wěn)定性好、環(huán)境適應(yīng)性高等綜合特點和優(yōu)勢系馁，使得它能夠幫助到更多科學(xué)家進(jìn)行衍射極限尺度以下的生物分子組織與相互作用等的尖端科學(xué)研究臂外，已為包括香港科技大學(xué)、香港大學(xué)喇颁、中山大學(xué)寄月、深圳大學(xué)、北京大學(xué)醫(yī)學(xué)院等在內(nèi)等超過50家科研小組和100位科研人員的科學(xué)研究的提供幫助无牵，并獲得了高度認(rèn)可漾肮。
iSTORM技術(shù)采用在特定成像緩沖液中具有光切換特性的有機染料茎毁。理論上克懊，與激光器波長兼容的光切換染料均適用。但是七蜘，用戶應(yīng)該嚴(yán)格測試染料的光切換特性谭溉，例如染料在成像緩沖液中的亮/暗工作周期。每個周期釋放出的光子越多橡卤、亮/暗工作周期越低扮念、切換次數(shù)越多的染料越合適。本手冊中提供的樣品制備方案均采用Alexa Fluorò 647 和Alexa Fluorò 750這一對熒光染料碧库，這是目前最適合iSTORM雙通道成像系統(tǒng)的選擇柜与。如果實驗僅需要觀察一個目標(biāo)（即單通道），Alexa Fluorò 647是首選乞哀，因為相比Alexa Fluorò 750谤变，Alexa Fluorò 647 每個切換周期釋放出更多的光子，且具有更短的工作周期趣情。
此外适系，諸如藍(lán)色吸收染料（Atto 488、Alexa 488纺辟、Atto 520）高骑、黃色吸收染料Cy3B、紅色吸收染料（Alexa 647脾仁、Cy5辈殃、Dyomics 654、Atto 680）和近紅外吸收Alexa 750等染料也都可以用來超高成像黑乞。
對生物結(jié)構(gòu)進(jìn)行特異性標(biāo)記可通過免疫染色（直接免疫染色法或間接免疫染色法）且以光切換染料標(biāo)記揉贡，也可以通過多肽或酶體（例如商業(yè)化產(chǎn)品SNAP-tag, CLIP-tag, 等等）標(biāo)記目標(biāo)蛋白。
適用于iSTORM系統(tǒng)的二抗已經(jīng)商業(yè)化且已被廣泛使用拟祖。用戶也可以考慮對一抗拣挪、FAB片段或者納米抗體進(jìn)行熒光標(biāo)記擦酌，由于熒光分子距離目標(biāo)蛋白更近，所以蛋白定位相比間接免疫熒光標(biāo)記法更加準(zhǔn)確菠劝。
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